Apicomplexan paraziták apikális komplex,

apicomplexan paraziták apikális komplex

Kategória: Távközlés A konzervált ankyrin ismétlődő fehérje szabályozza a conoid stabilitást, a mozgékonyságot és a sejtek invázióját a toxoplasma gondii természet kommunikáció - Távközlés - témák Parazita biológia Absztrakt Az apicomplexan parazitákat egy apikális komplex jellemzi, amely egy egyedülálló mikrotubulus-szervező központot MTOC tartalmaz, amely a citoszkeletont szervezi.

Az apikomplexán parazitákban, például a Toxoplasma gondii-banaz apikális komplex magában foglalja a tubulintartalmú rostok spirális kupakját, amit konoidnak neveznek. Habár ultrastrukturálisan leírták, a conoid összetétele és funkciói nagyrészt ismeretlenek.

Itt 11 korábban le nem írt apikális fehérjét lokalizálunk a T-ben. A CPH1 tartalmaz anyrin ismétléseket, amelyek szükségesek a konoid, a parazita motilitás és a gazdasejt invázió strukturális integritásához. A közelségjelölés és a fehérje kölcsönhatás-hálózat elemzése azt mutatja, hogy a CPH1 olyan hubot működtet, amely összekapcsolja a lényegében rendezetlen régiókat és a tekercses tekercs tartományokat tartalmazó kulcsfontosságú motorokat és szerkezeti fehérjéket.

Eredményeink kiemelik az esszenciális fehérje csomópontok jelentőségét az MTOC-k biológiai hálózatai kontrollálásában a protozoan paraziták korai elágazásában. Bevezetés Az Apicomplexa menedékjog a protozoák sokszínű csoportja, amely számos szabadon élő és parazita fajból áll 1.

  • A Candida paraziták gyógyulnak

Az Apicomplexans jelentős emberi betegségeket okoz, mint például a Plasmodium spp. Által okozott malária, a Toxoplasma gondii okozta toxoplazmózis és a Cryptosporidium spp.

A patkányt egy egyedülálló mikrotubulus-szervező központ MTOC egyesíti, amely egy poláris gyűrűs komplexből áll, amely összegyűjti a 2 membránt lezáró szingulett mikrotubulusokat. Az apikális komplex koordinálja a fehérje szekréciót, a csúszómotilitást, az aktív inváziót és a gazdasejtek kilépését 3.

Az apikális komplexnek nincs magasabb struktúrájú analóg szerkezete, és nagyjából ismert a morfológiai vizsgálatokból, amelyek eredetileg alapot képeztek az organizmusok ebbe a fajba való besorolásába 4. A konoid és a kortikális cytoskeleton kulcsszerepet játszanak az apicomplexans 5, 6 egyedülálló sejtosztódási módjaiban.

férgek gyermekeknél a megfázás megelőzése

Az apikomplexánok egy részhalmazában, az úgynevezett coccidians, az apikális komplexet a mikrotubulusban gazdag struktúra, a konoid 2 nevű jelenléte jellemzi. A spirális kúp az apikális polárgyűrűn túlnyúlik, vagy visszahúzódik az alá, az intracelluláris kalcium és az aktin-citoszkeleton által vezérelt folyamat.

Az apikális polárgyűrű a belső membrán komplex IMC határán helyezkedik el, a lapos membránrendszer, amely a plazmamembrán alatt fekszik, és amely egy olyan összekötő lemezrendszerből áll, amely visszafelé nyúlik, és amely a 10 alap komplexben csúcsosodik ki. A motilitás szempontjából kulcsfontosságú motorfehérjék léteznek a konoidban pl. MyoA Az apikális poláris gyűrű nagymértékben konzerválódott, míg a konoidok összetettsége az apikomplexánok között 2.

strobile törpe szalagféreg a keresztezett féreg fogyasztó

Például egy magasan fejlett konoid megtalálható a kokcidinekben, mint például az Eimeria spp. És a Neospora spp. Sarcocystis spp. Továbbá, a Cryptosporidium spp. Más apicomplexan fajok, mint például a Plasmodium spp. Az apikomplexánok pl. Colpodella és Perkinsis 16 és a Chromera velia 17 rokonai félig zárt kúpszerkezetet pszeudo-konoidot tartalmaznak az apikális végükön, ami egyes apicomplexánoknál látható conoidhoz kapcsolódik. E különböző fajok közül a T.

Ez az aszimmetrikus szerkezet kilenc tubulin protofilament 7-ből áll, és a közelmúltbeli vizsgálatokban a DCX-nek nevezett mikrotubulus-kötő fehérjét alkalmazzák e szokatlan tubulin polimer 18 szabályozásában.

Apicomplexa jellemzők, taxonómia, alcsoportok, morfológia

A DCX kettős kortin és Pα doméneket tartalmaz, amelyek a mikroorganizmusokhoz más szervezetekben kötődnek a stabilitás szabályozásához. A DCX törlése rövidebb konoidot és invázió hibákat apicomplexan paraziták apikális komplex Az apikális poláris gyűrűben megtalálható egyéb apikális fehérjék közé tartozik az RNG1, amely a 19 genetikai rendellenességre és az RNG2-re, melynek helminth invázió felnőtteknél befolyásolja a 20 mikronem szekréciót, ellenálló.

Ezenkívül a kinesin A és az apicomplexan paraziták apikális komplex poláris gyűrűs fehérje APR1 kettős deléciója az apikális poláris gyűrű fragmentálódását és a mikronémiás szekréció hibáját eredményezi. Itt hasonlítjuk össze az előre jelzett konoid proteomot az ismert apikálisan elhelyezkedő fehérjék transzkripciós profiljával, és epitópcímkézéssel alkalmazzuk, hogy a 21 jelölt et hiteles apikális komplex fehérjékként ellenőrizzük.

Ez az ankirin ismétlődő fehérje a Toxoplasma-ban alapvető fontosságú az invázió, a kilépés és a mozgékonyság szempontjából, annak ellenére, hogy nem befolyásolja a mikronem szekrécióját.

A közelítő címkézés, amely lehetővé teszi a biotin-ligáz fúziókat, azt mutatja, hogy ez a fehérje a konoid fehérje központjában CPH1 működik, amely egy interaktív fehérje közepén van, ami fontos a konoid strukturális integritásának szabályozásához.

Eredmények Apically lokalizált fehérjék felfedezése T. E jelöltek összehasonlítása hasonló profilokat tárt fel az S-M fázis csúcsszintjei között, amelyek a citokinézis során csökkentek és a G1 fázisban elérték a legalacsonyabb szintjüket 1a. Ezután manuálisan hasonlítottuk össze ezt az expressziós profilt a korábban definiált conoid prediktált proteomájával. Ábra 1. Kiegészítő táblázatamint azt korábban leírtuk 23, Az immunfluoreszcens festés megerősítette, hogy a jelölt fehérjék ét lokálisan helyeztük el az apikális végen, míg az egyik részlegesen apikális volt, és apicomplexan paraziták apikális komplex 10 lokalizált más rekeszekhez kiegészítő 1.

Ezt követően teszteltük a 11 apikálisan lokalizált fehérje esszenciáját egy kettős CRISPR egyetlen irányú RNS-stratégiával, hogy a géneket töröljük, amint azt korábban leírtuk. A 11 génből et könnyen törölhettünk, amint azt a diagnosztikai PCR 2a. Ábra megerősítette, és ezeknek a kiütéseknek apicomplexan paraziták apikális komplex volt észrevehető 9 vagy enyhe 1 növekedési hibája in vitro Kiegészítő 2. T-ben az apikális komplexhez lokalizált új fehérjék felfedezése.

A sejtciklus pinworms csecsemők kezelésében az expressziós mintán alapuló minták A CPH1 esszenciális fehérje szuperfelbontású apicomplexan paraziták apikális komplex a konoidban.

A piros nyilak jelzik az aranyrészecskék eloszlását a mikrotubulusok mentén. A képek három vagy több hasonló eredményű kísérletet reprezentálnak.

A CPH1 ortológokat 1. Ezért a szuperfelbontású mikroszkóppal vizsgáltuk a CPH1 eloszlását a sejtekben, ahol a conoid kiálló volt, és összehasonlította a mintát az ismert fehérjékkel, az RNG2 20 és CaM1 mal. Kiegészítő táblázat. A szuperfelbontású mikroszkóppal kiderült, hogy a CPHHA egy keskeny sávban koncentrálódott a kiálló konoidon belül 1c.

A CPHHA festése a konoid széles tartományát jelölte meg, amely részben átfedésben volt mindkét referencia fehérjével 1c. A CPH1 két ankyrin domént tartalmaz T-ben. A menedék más tagjai, beleértve a korai elágazó gregarint is, tartalmazzák a CPH1 ortológjait, bár nem tartalmazzák a konzervált ankyrin ismétléseket 1e.

apicomplexan paraziták apikális komplex mint felnottekben a férgek eltavolitasara

A CPH1 elengedhetetlen a parazita mozgékonyságához, az invázióhoz és a kilépéshez Apicomplexan paraziták apikális komplex CPH1 funkciójának szétválasztásához feltételes knockdown CPH1-AID vonalat állítottunk elő a korábban a T-ben található alapvető gének tanulmányozására kifejlesztett auxin-indukálható degron rendszer segítségével. Ábra is megerősítette. Ábra, 3a. A CPH1 alapvető természetének vizsgálatához megvizsgáltuk, hogy a paraziták képesek-e plakkokat képezni a gazdasejt monorétegeken.

Ábra, 3b. Az auxin-kezelés 25— μM koncentráció tartományban volt hatásos anélkül, apicomplexan paraziták apikális komplex káros hatással lenne a szülői TIR1 vagy a gazdasejt monoréteg növekedésére kiegészítő apicomplexan paraziták apikális komplex 3c — f.

A CPH1 elengedhetetlen a parazita motilitásának, az inváziónak és a kilépésnek, de nem a mikronem szekréciónak. Aldoláz α-ALD töltésszabályozás.

A Western blot-t úgy végezzük, mint a 3A. Kiegészítő ábra. Az e- g parazit vonalakat ± IAA-ban 40—44 órán keresztül növesztettük, apicomplexan paraziták apikális komplex az extracelluláris parazitákat összegyűjtöttük és azonnal használtuk fel a vizsgálatokhoz. Az RLU relatív lumineszcencia egységek, ns nem jelentősek Teljes méretű kép A plakk-képződés parazita motilitást, inváziót és kilépést igényel, amelyek a mikroniákból szekretált adhénektől függenek.

Ezért megvizsgáltuk, hogy a CPH1 kimerülése hatására mikronem szekréciót érintenek. Az agonista által kiváltott szekrécióhoz riporterként használtuk a Gaussia luciferázhoz MIC2-GLuc fuzionált 2 szekréciós mikronemproteint, amint azt korábban leírtuk A videomikroszkópos vizsgálatok azonban azt mutatták, hogy az extracelluláris paraziták hasonló körülmények között jelentősen romlottak a mozgékonyságban 2f.

A csökkent mozgékonysággal összhangban a parazita invázió erősen gátolt volt 2g. Az intracelluláris parazitákban a gazdasejtből történő parazita kimenetéhez mikronemszekrécióra van szükség, és a folyamat kezdeti lépéseit a TgPLP1 felszabadulása közvetíti, amely megzavarja a 29 parazitoforos vacuolét.

baromfi orsofereg gyógyszer szivfergesseg ellen

Az intracelluláris paraziták mikroneme-szekréciójának monitorozásához a vakuole permeabilizálását a DsRed szekretált formájának diffúziójával vizsgáltuk, amint azt korábban leírtuk A CPH1-AID vonal kalcium-ionoforral történő kezelésénél mind auxin jelenlétében, mind a távollétében a DsRed gyorsan diffundált a parazitoforos vakuolból a gazdasejtek citoplazmájába.

Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CPH1 kimerülését követően a sejten belüli parazitákban a mikronem szekréció általában normális. Apicomplexan paraziták apikális komplex a gazdasejtekből származó ionofor által kiváltott paraziták e körülmények között teljesen blokkolódtak 2j. A CPH1 szükséges az extracelluláris paraziták konoid stabilitásához Mivel a CPH1 kizárólag a konoidra lokalizálódott, azon tűnődtünk, hogy vannak-e hibák a conoid kialakulásában a fehérje kimerülése után.

Az intracelluláris replikálódó parazitákban a conoidot transzmissziós elektronmikroszkóppal TEM vizsgáltuk CPH1-AID parazitákban, amelyeket auxin hiányában vagy jelenlétében tenyésztettünk.

A spirális alakú konoidot képező tubulintartalmú, fehérjeszálakban nem volt nyilvánvaló változás 3a.

Ábrajelezve, hogy a konoid szerelvény normális volt. Ezt követően meghatároztuk, hogy Novokuznetsk tisztítás a parazitáktól kónusz kiválhat-e extracelluláris parazitákba kalciumionoforral történő stimuláció után, amelyről ismert, hogy aktiválja ezt a folyamatot 9.

A CPH1 kimerülésnek nincs hatása a konoid nyúlványra 3b. A kontroll és az auxin-kezelt CPH1-AID parazitákat detergensként extraháltuk és negatív festéssel és átvitellel vizsgáltuk EM, egy olyan folyamatot, amely feltárja a 7, 8 konoid architektúrát. A parazitákban, ahol a CPH1 lebomlott, a konoidot lerövidítették és részben összeomlott 3c.

Ezeknek a hatásoknak a mennyiségi meghatározása amint az a 3c. Ábrán látható kimutatta, hogy a CPH1 kimerülése után a konoidot hosszban d csökkentettük, és szélességben az elülső a az előkonoid gyűrűka középső b és hátsó régiók c az zombizáló paraziták poláris gyűrű 3d.

A CPH1 szükséges az extracelluláris paraziták konoid stabilitásához.

Állattan | Digitális Tankönyvtár

Mikrotubuláris spirálok, amelyek tangenciális szakaszokban kék nyílhegy vagy keresztmetszetben fehér nyíl láthatók. A DMSO kontrollként szolgált. A bal alsó kép a konoid szélességének és hosszának mérését mutatja a - d jelzéssel. A nyíllal jelölt vonal a d.

Az 1-es ankirin-domén konzerváltabb, és a től ig terjedő 48—es mag maradékokból származik, míg a 2-es anyrin-domén degeneráltabb, és a től ig terjedő maradékokig terjed 4a. Ezzel ellentétben a CPH1 -ank1 -Tuk a citoszolhoz auxin hiányában nem volt célzott, de részlegesen lokalizálódott az apikális végre, és képes volt kiegészíteni a CPH1-AID vonalat, amely az auxin jelenlétében nőtt 4b.

Alternatív módon lehetséges, hogy az anyrin ismétlődő régiók szükségesek a megfelelő összecsukáshoz, és hogy más domének közvetítik a CPH1 kölcsönhatását a konoiddal. Az ankirin megismétli a CPH1 célpontot a konoidhoz, és kritikusak a működés szempontjából. A plakkok kialakulása jobbramiután a növekedést ± IAA-ban 7 napig jobbra tette. A parazitákat ± IAA-ban órán át tenyésztettük, összegyűjtöttük és 3 µM Avel stimuláltuk 10 percen keresztül, hogy kitáguljanak a konoidban.

Ezt a megközelítést a hagyományos immun-kicsapásnál választottuk, mivel a CPH1 nem volt trichocephalosis gyermekeknél a mosószerrel kivont sejtekben 4a. A CPH1-hez fuzionált BirA biotin címkézés kiegészítő ábra 4b számos további fehérje sávot észlelt, amelyeket sztreptavidinnel detektáltak a szülői kontrollhoz képest kiegészítő ábra 4c.

Ezeket a további biotinilált fehérjéket az apikális végen koncentráltuk, apicomplexan paraziták apikális komplex azt apicomplexan paraziták apikális komplex jelölt sztreptavidinnel festettük kiegészítő ábra 4d.

Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a BirA fúziók helyesen célozódnak, és ez a megközelítés alkalmas volt a CPH1-vel kölcsönhatásba lépő fehérjék azonosítására. Ennek a megközelítésnek a kibontásához és a közelségalapú, fehérje-fehérje interaktív kialakításához a Conoid-ot más konoid fehérjékkel, köztük a MyoH 11 és az RNG2 esszenciális fehérjével 4e, f kiegészítettük.

Több olyan kalmodulin-szerű fehérjét is beleértünk, amelyek a közelmúltban lokalizáltak a konoidhoz és amelyek szabályozhatják a MyoH-t pl.

  • Labirintus korall Meandrina meandrites Forrás: commons.
  • Milyen szerveket fertőz az emberi körgyűrű
  • Hogyan kell tablettákat használni férgek számára

Ezek a BirA fúziók mindegyike hatékonyan jelezte a sejt apikális csúcsát, az endogén biotinilált fehérjéknek köszönhetően sztreptavidin címkézés mellett, amely az apikoplaszthoz kapcsolódik kiegészítő ábra 4d, g.

A parazita apicomplexan paraziták apikális komplex végén kevésbé intenzív címkézést figyeltek meg az RNG2-re feregtelenites ismetlese BirA esetében, ami valószínűleg a címkézés hatékonyságának különbségéből adódik.

A komplex adatállományok lehetséges interakcióinak azonosításához az Egyszerű szűrés indeX program SFINX programot használtuk, amely statisztikailag robusztus módszert biztosít a valódi kölcsönhatások meghatározására, miközben a hamis pozitívokat a replikált apicomplexan paraziták apikális komplex kiszűri Az SFINX hálózaton vagy interaktívan is megjeleníti a szigorúság csúszóablakát, amely meghatározza az értelmes interakciók levágását.

Ábra; az 1. Ez az elemzés 19 fehérjét tárt fel, amelyek kölcsönhatásba lépnek a CPH1-vel 5a. Ábra és 2.

Ábraamely szerepet játszik a 18 konoidot tartalmazó új tubulin-tartalmú rostok kialakításában. Bár az SFINX nem képes külön-külön elemezni ezeket az adatkészleteket, a Scaffold statisztikai csomagjának elemzése során csak két jelentős különbséget azonosítottunk a címkézési mintában Kiegészítő 6.

Két hipotetikus fehérjét specifikusan BirA-RNG2-vel jelöltek: ezek közül az egyik mikrotubulusú fehérje domént tartalmaz, míg a másik nem mutat homológiát 6. Ábra, 2. A CaM1 és a CaM2 számos interakciós partnerrel is rendelkezik 5a. A CPH1 egy központi hub, amely a conoidban több fehérjével kölcsönhatásba lép.

Lehet, hogy érdekel